ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG DER TEST
Malaria ist eine durch Moskitos übertragene, hämolytische, fieberhafte Krankheit, die über 200 Millionen Menschen infiziert und mehr als 1 Million Menschen pro Jahr tötet.Es wird durch vier Arten von Plasmodium verursacht: P. falciparum, P. vivax, P. ovale und P. malariae.Diese Plasmodien infizieren und zerstören alle menschliche Erythrozyten und erzeugen Schüttelfrost, Fieber, Anämie und Splenomegalie.P. falciparum verursacht schwerere Krankheiten als die anderen plasmodialen Arten und ist für die meisten Todesfälle durch Malaria verantwortlich.P. falciparum und P. vivax sind die häufigsten Krankheitserreger, es gibt jedoch beträchtliche geografische Unterschiede in der Artenverteilung.
Traditionell wird Malaria durch den Nachweis der Organismen auf Giemsa-gefärbten dicken Ausstrichen von peripherem Blut diagnostiziert, und die verschiedenen Arten von Plasmodium werden durch ihr Auftreten in infizierten Erythrozyten unterschieden1.Die Technik ermöglicht eine genaue und zuverlässige Diagnose, jedoch nur, wenn sie von erfahrenen Mikroskopikern unter Verwendung definierter Protokolle2 durchgeführt wird, was große Hindernisse für die abgelegenen und armen Gebiete der Welt darstellt.
Das Malaria Pf/Pan-Antigen-Schnelltestkit wurde entwickelt, um diese Hindernisse zu lösen.Der Test verwendet ein Paar monoklonaler und polyklonaler Antikörper gegen das P. falciparum-spezifische Protein, Histidin Repeat Protein II (pHRP-II), und ein Paar monoklonaler Antikörper gegen Plasmodium-Laktat-Dehydrogenase (pLDH), ein Protein, das von den vier Arten der Plasmodium, ermöglicht somit den gleichzeitigen Nachweis und die Differenzierung der Infektion mit P. falciparum und/oder einer der anderen drei Plasmodien.Es kann von ungeschultem oder minimal qualifiziertem Personal ohne Laborausrüstung durchgeführt werden.
PRINZIP
Das Pf/ Pan Malaria-Schnelltest-Kit ist ein chromatographischer Lateral-Flow-Immunoassay.Die Teststreifenkomponenten bestehen aus: 1) einem weinroten Konjugat-Pad, das mit kolloidalem Gold konjugierte anti-pLDH-Maus-Antikörper (pHRP II-Gold-Konjugate) und mit kolloidalem Gold konjugierte Maus-anti-pLDH-Antikörper (pLDH-Gold-Konjugate) enthält.
2) einen Nitrozellulose-Membranstreifen, der zwei Testbanden (Pan- und Pv-Banden) und eine Kontrollbande (C-Bande) enthält.Das Pan-Band ist mit monoklonalem Anti-pLDH-Antikörper vorbeschichtet, wodurch die Infektion mit einer der vier Arten von Plasmodien nachgewiesen werden kann, das Pf-Band ist mit polyklonalen Anti-pHRP-II-Antikörpern zum Nachweis einer Pf-Infektion vorbeschichtet, und das C-Band ist mit Ziegen-anti-Maus-IgG beschichtet.
Während des Assays wird ein angemessenes Volumen der Blutprobe in die Probenvertiefung (S) der Testkassette gegeben, ein Lysepuffer wird in die Puffervertiefung (B) gegeben.Der Puffer enthält ein Detergens, das die roten Blutkörperchen lysiert und verschiedene Plasmodium-Antigene freisetzt, die durch Kapillarwirkung über den in der Kassette enthaltenen Streifen wandern.pHRP-II, falls in der Probe vorhanden, bindet an die pHRP-II-Gold-Konjugate.Der Immunkomplex wird dann von den vorbeschichteten Anti-pHRPII-Antikörpern auf der Membran eingefangen und bildet eine weinrote Pf-Bande, die ein positives Pf-Testergebnis anzeigt.pLDH, falls in der Probe vorhanden, bindet an die pLDH-Goldkonjugate.Der Immunkomplex wird dann durch den vorbeschichteten Anti-pLDH-Antikörper auf der Membran eingefangen und bildet eine burgunderfarbene Pan-Bande, die auf ein positives Plasmodium-Testergebnis hinweist.In Abwesenheit von Panband kann ein positives Testergebnis für eine der anderen drei Plasmodien empfohlen werden.
Das Fehlen jeglicher Testbanden (Pan und Pf) weist auf ein negatives Ergebnis hin.Der Test enthält eine interne Kontrolle (C-Bande), die unabhängig von der Farbentwicklung auf einer der Testbanden eine weinrote Bande des Immunkomplexes aus Ziege-anti-Maus-IgG/Maus-IgG (pHRP-II- und pLDH-Gold-Konjugate) aufweisen sollte .Andernfalls ist das Testergebnis ungültig und die Probe muss mit einem anderen Gerät erneut getestet werden.
