ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG DER TEST
Malaria ist eine durch Moskitos übertragene, hämolytische, fieberhafte Krankheit, die über 200 Millionen Menschen infiziert und mehr als 1 Million Menschen pro Jahr tötet.Es wird durch vier Arten von Plasmodium verursacht: P. falciparum, P. vivax, P. ovale und P. malariae.Diese Plasmodien infizieren und zerstören alle menschliche Erythrozyten und erzeugen Schüttelfrost, Fieber, Anämie und Splenomegalie.P. falciparum verursacht schwerere Krankheiten als die anderen plasmodialen Arten und ist für die meisten Todesfälle durch Malaria verantwortlich.P. falciparum und P. vivax sind die häufigsten Krankheitserreger, es gibt jedoch beträchtliche geografische Unterschiede in der Artenverteilung.
Traditionell wird Malaria durch den Nachweis der Organismen auf Giemsa-gefärbten dicken Abstrichen von peripherem Blut diagnostiziert, und die verschiedenen Arten von Plasmodium werden durch ihr Auftreten in infizierten Erythrozyten unterschieden.Die Technik ist zu einer genauen und zuverlässigen Diagnose in der Lage, jedoch nur, wenn sie von erfahrenen Mikroskopikern unter Verwendung definierter Protokolle durchgeführt wird, was große Hindernisse für die abgelegenen und armen Gebiete der Welt darstellt.
Zur Lösung dieser Hindernisse wurde der Malaria Pf/Pv Ag Schnelltest entwickelt.Es verwendet Antikörper, die spezifisch für P. falciparum Histidin Rich Protein-II (pHRP-II) und P. vivax Lactate Dehydrogenase (Pv-LDH) sind, um Infektionen mit P. falciparum und P. vivax gleichzeitig zu erkennen und zu differenzieren.Der Test kann von ungeschultem oder minimal qualifiziertem Personal ohne Laborausrüstung durchgeführt werden
PRINZIP
Der Malaria Pf/Pv Ag-Schnelltest ist ein chromatographischer Lateral-Flow-Immunoassay.Die Streifentestkomponenten bestehen aus: 1) einem burgunderfarbenen Konjugat-Pad, das Maus-anti-Pv-LDH-Antikörper, konjugiert mit kolloidalem Gold (Pv-LDH-Gold-Konjugate), und Maus-anti-pHRP-II-Antikörper, konjugiert mit kolloidalem Gold (pHRP-II -Gold-Konjugate), 2) einen Nitrozellulose-Membranstreifen mit zwei Testbanden (Pv- und Pf-Banden) und einer Kontrollbande (C-Bande).Die Pv-Bande ist mit einem anderen Maus-Anti-Pv-LDH-spezifischen Antikörper zum Nachweis einer Pv-Infektion vorbeschichtet, die Pf-Bande ist mit polyklonalen Anti-pHRP-II-Antikörpern zum Nachweis einer Pf-Infektion vorbeschichtet, und die C-Bande ist beschichtet mit Ziegen-Anti-Maus-IgG.
Während des Assays wird ein angemessenes Volumen der Blutprobe in die Probenvertiefung (S) der Testkassette gegeben, ein Lysepuffer wird in die Puffervertiefung (B) gegeben.Der Puffer enthält ein Detergens, das die roten Blutkörperchen lysiert und verschiedene Antigene freisetzt, die durch Kapillarwirkung über den in der Kassette enthaltenen Streifen wandern.Pv-LDH, falls in der Probe vorhanden, bindet an die Pv-LDH-Gold-Konjugate.Der Immunkomplex wird dann durch den vorbeschichteten Anti-Pv-LDH-Antikörper auf der Membran eingefangen und bildet eine weinrote Pv-Bande, die ein Pv-positives Testergebnis anzeigt.Alternativ bindet pHRP-II, falls in der Probe vorhanden, an die pHRP-II-Gold-Konjugate.Der Immunkomplex wird dann von den vorbeschichteten Anti-pHRP-II-Antikörpern auf der Membran eingefangen und bildet eine weinrote Pf-Bande, die ein positives Pf-Testergebnis anzeigt.Das Fehlen jeglicher Testbanden weist auf ein negatives Ergebnis hin.Der Test enthält eine interne Kontrolle (C-Bande), die unabhängig von der Farbentwicklung eine weinrote Bande des Immunkomplexes aus Ziege-Anti-Maus-IgG/Maus-IgG (Anti-Pv-LDH und Anti-pHRPII)-Gold-Konjugaten aufweisen sollte der Testbänder.Andernfalls ist das Testergebnis ungültig und die Probe muss mit einem anderen Gerät erneut getestet werden.
